细胞增殖检测

应用简介

MTT，CCK-8，BrdU，EdU等方法是常见的细胞增殖检测技术，分别从代谢活性和DNA合成的角度来反应细胞的增殖情况。MTT和CCK-8检测原理为活细胞线粒体中的一些脱氢酶能使检测试剂还原为甲瓒，而死细胞无此功能。BrdU和EdU则能都在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子，通过基于与荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性。

MTT技术原理

活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。

实验方法

Step1：细胞培养

Step2：细胞转染或其他前期处理

Step3：接种细胞于96孔板

Step4：药物处理

Step5：加MTT

Step6：加DMSO

Step7：测OD490

 

技术总结

细胞铺板前，计数一定要准确。稀释时需多预备几个孔，以防吹打混匀时形成泡泡造成细胞悬液不够铺满预定的孔中。药物处理铺板104个细胞/孔，细胞增殖铺板0.5×104个细胞/孔；铺板细胞密度镜下观察所有孔细胞都是均匀的；切记需要设置空白培养基的空白组，空白细胞的对照组。

添加MTT后4h需要除去上清，但需谨慎不得触碰到孔底部的紫色沉淀，且不同组之间记得换掉枪头。上清除去胡加入DMSO溶解沉淀，充分振荡，使沉淀溶解。而MTS和CCK-8则可直接测定吸光度值。